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奧林巴斯顯微鏡掃描電鏡標(biāo)本的制作技巧

更新時(shí)間:2017-10-25瀏覽:1402次

 奧林巴斯顯微鏡相比其他顯微鏡擁有著強(qiáng)大的技術(shù)優(yōu)勢,與透射電鏡一樣,掃描電鏡標(biāo)本也是在真空中進(jìn)行觀察,因此必須干燥,而且干燥后樣品表面不變形。這是對樣品的第二個(gè)要求。生物樣品含水較多,干燥后容易皺紹。因此,在掃描電鏡標(biāo)本制備中有些特殊的干燥方法。

奧林巴斯顯微鏡


  奧林巴斯生物顯微鏡掃描電鍍是用來觀察樣品表面的結(jié)構(gòu)。主要是利用二次電子信號(hào)成像來觀察樣品的表面形態(tài),即用極狹窄的電子束去掃描樣品,通過電子束與樣品的相互作用產(chǎn)生各種效應(yīng),其中主要是樣品的二次電子發(fā)射。因此對掃描電鏡標(biāo)本的第一個(gè)要求是把待觀察的表面完整無損的暴露出來,固定好。
  奧林巴斯顯微鏡就這三方面要求分別加以介紹。
  奧林巴斯生物顯微鏡電鍍標(biāo)本必須干燥。我們觀察樣品是觀察細(xì)胞表面的原貌,富有微細(xì)結(jié)構(gòu)的樣品表面往往經(jīng)過脫水及干燥后(特別是空氣中干燥后)發(fā)生嚴(yán)重變形。原因是液價(jià)(特別是水)的表面張力破壞了微紉結(jié)構(gòu)。雖然有些可揮發(fā)介質(zhì)如乙醇或丙圍的表面張力較小,但對類如氣管上皮表面纖毛這樣的細(xì)微結(jié)構(gòu)仍有損傷。因此,自奧林巴斯生物顯微鏡掃描電鏡問世后,雖然不少學(xué)者擬用于觀察生物樣品,就是因?yàn)檫^不好“干燥”這一關(guān)而未曾得到好的生物軟組織的掃描電鍍照片。自從1969年開始使用臨界點(diǎn)于操法后,將掃描電鏡的生物樣品制備大大推進(jìn)了一步。目前世界上電鏡實(shí)驗(yàn)室多應(yīng)用臨界點(diǎn)干燥法與冷凍干燥法對掃描電鏡進(jìn)行干燥。
  奧林巴斯顯微鏡掃描電鎊觀察的表面一般是組織或器官的自然表面,如呼吸邏,消化道,泌尿及生殖管道的上皮表面。機(jī)體中分散細(xì)胞的自然表面以及骨胳等硬組織的自然面等。取材時(shí),對于待觀察的部分要保護(hù)好,切勿用器械觸碰。如果上面粘有分泌物,粘濃或糞塊等污物,必須在固定前去除,以免遮蓋表面微紉結(jié)構(gòu),清除的方法一般是用溫生理鹽水或緩沖液沖洗或噴射沖洗,硬組織可用超聲波(低頻)清洗。有的實(shí)驗(yàn)室用蛋白酶類清洗表面的粘液,但必須注意,蛋白酶不僅可除去表面粘附物,也可破壞樣品表面的蛋白質(zhì)。對于分散細(xì)胞表面的處理參見另一節(jié)。需特別提出的是,暴露出的表面需要清洗,但保存標(biāo)本的原則與透射電鏡標(biāo)本完全相同;如動(dòng)物處死方法,取材速度及要求樣品中斷血液供應(yīng)后1-2分鐘內(nèi)進(jìn)入團(tuán)定液等。與透射電鏡標(biāo)本唯一不同的一點(diǎn)是樣品體積可大些。由子樣品臺(tái)較大,景深較深,掃描電鏡樣品塊可在10mm見方,5mm高的范圍。

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