為生物標(biāo)本深層成像而設(shè)計的多光子激光掃描顯微鏡FVMPE-RS有助于發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在活組織內(nèi)的功能和相互作用。

高靈敏度、高分辨率的深層多光子成像

FVMPE-RS多光子顯微鏡采用了先進技術(shù)和光學(xué)設(shè)計，可提高深度成像靈敏度和分辨率。

400 nm至1600 nm的超寬光譜透過率可在不影響短波長檢測的情況下實現(xiàn)更*效近紅外激發(fā)

大靶面檢測光路可以匯集更多的發(fā)射信號，尤其是大角度的散射光子

TruResolution物鏡可通過自動球差補償提高深度成像亮度和分辨率，從而獲得三維圖像在各個層面上的更多細(xì)節(jié)信息
 

使用具有自動球差校正功能的TruResolution物鏡捕捉的活體小鼠大腦（Thy1-YFP-H小鼠，感覺皮層）的3D重建圖像（左），以及在約600μm深度圖像的*大亮度投影。不使用（右上）和使用（右下）自動球差校正功能采集的圖像。
圖像采集于RIKEN BSI-Olympus合作中心，并由Hiromu Monai博士、Hajime Hirase博士和Atsushi Miyawaki博士提供。

適用于快速動態(tài)細(xì)胞內(nèi)生物過程的高速成像
高速共振掃描和高分辨率掃描為標(biāo)準(zhǔn)配置。
以每秒30幀速度進行全視場成像可減少體內(nèi)和活細(xì)胞成像的圖像拖尾
*高438 fps的成像速度讓您能夠捕獲諸如血液流動時的細(xì)胞運輸以及神經(jīng)元和其他細(xì)胞中的鈣信號傳遞事件等快速動態(tài)現(xiàn)象
光譜覆蓋范圍更廣的多波長激發(fā)
FVMPE-RS成像平臺可配置雙光譜線紅外激光或兩套獨立紅外脈沖激光器，以實現(xiàn)多通道多光子激發(fā)成像。

無需反復(fù)調(diào)諧激光即可實現(xiàn)針對各種熒光團的*優(yōu)激發(fā)

每條激光線的獨立功率控制可以更容易同時捕捉具有不同效率的熒光團
大于1000 nm的激光波長可用于激發(fā)日益廣泛應(yīng)用的的紅色熒光染料，并讓三次諧波成像成為可能

豬脂肪組織的三次諧波成像。使用1250 nm的飛秒激光照射未標(biāo)記的豬脂肪組織，檢測到膠原纖維的625 nm二次諧波，以及脂質(zhì)界面的416 nm三次諧波。

*端應(yīng)用的選配功能

FVMPE-RS多光子顯微鏡可根據(jù)您的研究需求，輕松升級不同功能模塊。
選配功能包括：
用于光遺傳學(xué)和其他光操縱實驗的獨立掃描振鏡光路
支持電生理實驗的ANALOG輸入通道
在多光子成像結(jié)合行為學(xué)實驗中，可與外部刺激數(shù)字TTL輸入/輸出同步觸發(fā)



直觀清晰的軟件布局，專為多光子成像優(yōu)化
可自定義軟件界面和布局，幫助您提高工作效率：
根據(jù)您的實驗量身定制用戶界面
快速訪問您所需要使用的*端功能模塊
保存采圖設(shè)置和參數(shù)，并在下一次實驗室重新調(diào)用
在線分析和圖像處理（包括光譜拆分和3D渲染）

每秒高達438幀的*速掃描
可在一套系統(tǒng)中配置快速共振掃描振鏡和線性常規(guī)掃描振鏡，以實現(xiàn)高速和高分辨率成像。通過在全視場（FN 18）以512×32像素實現(xiàn)高達438 fps的采集速率，以512×512像素實現(xiàn)高達30 fps的采集速率，您可以：
進行動態(tài)樣本成像時可避免圖像拖尾
跟蹤血流中快速移動的細(xì)胞
觀察神經(jīng)元和其他細(xì)胞的快速膜電位動態(tài)


*效激光傳輸
鍍銀掃描振鏡有助于向樣品輸送更強激光，從而獲得更明亮的圖像。
與傳統(tǒng)的鍍鋁振鏡相比，更高的近紅外范圍反射率對于在體深層實驗特別有利。

高靈敏檢測光路可*大限度發(fā)揮熒光成像性能
利用高靈敏度的磷化砷化鎵（GaAsP）光電倍增管（PMT）檢測器從微弱熒光中捕捉高信噪比（SNR）圖像。與標(biāo)準(zhǔn)多堿（MA）光電倍增管相比，其具有更高的量子效率，并且使用Peliter固體制冷，既能減少風(fēng)扇冷卻帶來的振動，還能更進一步提高信噪比。
如果您使用明亮發(fā)光的樣品，還可以配合多堿檢測器使用，以獲得更寬動態(tài)范圍。
為了獲得更高光效率，檢測路徑采用了大靶面光學(xué)器件，能夠更好地捕獲散射熒光光子，并充分利用多光子物鏡的寬視場檢測能力。

專為深度成像設(shè)計的多光子物鏡
在透明化組織中，可觀察到8毫米的深度
更寬視場讓奧林巴斯的專用多光子物鏡能夠有效捕獲散射熒光光子，獲得體內(nèi)和體外標(biāo)本深層的更明亮圖像。豐富的產(chǎn)品系列讓您能根據(jù)自己的研究需求選擇物鏡
不同的光學(xué)設(shè)計均具備高數(shù)值孔徑、長工作距離、寬視場，并可兼容各種浸沒介質(zhì)和組織透明化試劑
校正環(huán)可為折射率、蓋玻片厚度和組織深度提供校正和補償
TruResolution物鏡可進行全自動球差校正

采用*端光學(xué)鍍膜技術(shù)實現(xiàn)更*效的紅外透過
我們的多光子物鏡和掃描光路全部采用可實現(xiàn)從400 nm到1600 nm出色透射率的奧林巴斯1600nm光學(xué)鍍膜。
*效的紅外透過率讓深層熒光激發(fā)能量更高，同時光路在短波長的出色表現(xiàn)可確保熒光和二次諧波等信號*效收集。

利用深焦成像模式*大限度提高信號強度
深焦成像模式可根據(jù)激光散射情況調(diào)整激光光束的直徑。對于激光散射嚴(yán)重的活體標(biāo)本，深焦成像模式將會收緊光束以便讓更多激發(fā)光子到達樣品更深位置，從而獲得更明亮的圖像。

獨立的光刺激控制
為了進行*確的微秒級別的光刺激和光漂白實驗，需要添加：
一套獨立掃描振鏡（SIM掃描振鏡）
可見光激光模塊
可自定義任意感興趣的刺激區(qū)域（ROI）。在需要更高速度情況下，也可使用隨機多點時序刺激。
在兩條紅外成像譜線的系統(tǒng)上，配備SIM掃描振鏡可實現(xiàn)多光子成像和同步刺激。

為電生理和光遺傳學(xué)設(shè)定的微秒級*確控制
硬件時序管理功能具備微秒級重復(fù)精度，可以*確控制外觸發(fā)和點刺激。
刺激和成像可以在空間和時間上實現(xiàn)*確同步，進而*準(zhǔn)捕獲動態(tài)過程中的快速反應(yīng)。對于電生理學(xué)和光遺傳學(xué)而言，意味著能夠區(qū)分同步刺激響應(yīng)和異步刺激響應(yīng)之間的差異。
對于長時間的采集以及需要在成像任務(wù)之間進行切換的復(fù)雜程序?qū)嶒灒瑫r序管理器軟件模塊可確保毫秒級精度，在體內(nèi)和體外實驗中提供高質(zhì)量數(shù)據(jù)。

使用ANALOG單元同步電生理數(shù)據(jù)和激光刺激
支持電生理實驗?zāi)M信號輸入和TTL I/O 信號。ANALOG單元將外部電壓信號記錄為圖像數(shù)據(jù)。將光刺激過程中用膜片鉗測量得到的電信號與采集到的圖像同步，并以光強度偽彩圖層的方式展示。
了解有關(guān)ANALOG單元的更多信息
多點和繪圖軟件模塊（MMASW）可以對多個任意選擇的點或矩形感興趣區(qū)域（ROI）中的點進行*確光刺激，以進行繪圖掃描，同時記錄來自膜片鉗系統(tǒng)的電壓信號。
多點掃描：用戶可以在圖像上定義光刺激點的數(shù)量?？梢詾槊總€獨立刺激點選擇不同的激光譜線進行刺激。
繪圖掃描：該軟件可防止相鄰點受到激發(fā)，從而可以更準(zhǔn)確地觀察目標(biāo)的反應(yīng)。
在微秒級精度內(nèi)設(shè)定刺激開始時間、持續(xù)時間和間隔時間，并可使用連續(xù)或脈沖刺激對實驗進行編程。

*ChR2和NpHR相結(jié)合的實驗中，使用配備多個激光器的SIM掃描振鏡控制多點激光逐點掃描。

創(chuàng)建3D刺激反應(yīng)圖譜
在測量對光刺激的電生理反應(yīng)時，專用地圖/繪圖掃描可利用偽隨機時序獲得更*確的空間反應(yīng)圖。電膜片鉗電記錄和鈣離子或電壓指示器的熒光信號可在高分辨率圖像上疊加。可使用強度閾值篩選反應(yīng)z活躍的區(qū)域，并對這個區(qū)域設(shè)置步高速掃描?？墒褂眠x配壓電Z軸獲取3D反應(yīng)圖。

實現(xiàn)大視場和高分辨率的結(jié)合
多位點延時（MATL）功能可實現(xiàn)在更高分辨率和更寬視野下查看標(biāo)本全局：
使用電動載物臺自動在超寬視野內(nèi)拍攝和拼接圖像
在整個視野甚至非相鄰區(qū)域中進行不同條件的延時拍攝
通過繪圖功能輕松定位大尺寸圖像中特定細(xì)胞

圖片數(shù)據(jù)由蘇黎世大學(xué)顯微鏡和圖像分析中心Urs Ziegler和Jose Maria Mateos提供。小鼠L15譜系由巴塞爾生物醫(yī)學(xué)研究所的Pico Caroni提供。

*確的實驗操控
時序管理器讓協(xié)作實驗變得更加輕松。您可以按*確的時間輕松組織和加快復(fù)雜方案，其中包括：
在時間序列成像過程中更改幀速
在不同的激發(fā)波長之間自動切換
成像采集同時在不同位置重復(fù)光刺激事件
可以保存和重新加載實驗設(shè)置，確保實驗重復(fù)性。

光譜拆分可解決通道串色問題

多色標(biāo)記的生物熒光樣品一旦出現(xiàn)光譜重疊或串色，很容易影響分析結(jié)果。現(xiàn)在可以利用盲拆算法或先前保存的多通道配置文件的光譜反卷積功能分離疊加的光譜通道。對于這種情況，可以通過盲拆分算法，或基于提前保存的多通道文件進行光譜拆分。除了圖像后處理，在預(yù)覽的同時也能進行實時光譜拆分。

3D渲染
大量Z-stack數(shù)據(jù)可渲染為3D模式顯示?？梢詫⒅匾嬅娴怯洖殛P(guān)鍵幀，從而輕松創(chuàng)建可以縮放和過渡到其他角度的3D動畫視圖。

使用德克薩斯紅標(biāo)記的小鼠腦部血管的4mm深度 三維圖像
感謝以下人員提供圖像數(shù)據(jù)：日本RIKEN腦科學(xué)研究所細(xì)胞功能動力學(xué)實驗室Hiroshi Hama、Rie Ito、Atsushi Miyawaki

循環(huán)平均化降噪處理

低激光功率高速掃描盡管可以大限度降低光毒性，但往往會降低信噪比，從而難以獲得高分辨率的時間序列圖像。通過循環(huán)平均化降噪處理，您不但可以調(diào)整快速延時圖像獲得更高的信噪比，同時還可保持時間分辨率并保留原始數(shù)據(jù)。

（左）以低激光功率（0.05％，488nm）采集的原始30 fps數(shù)據(jù)。
（右）以低激光功率采集的30 fps數(shù)據(jù)進行了循環(huán)平均化降噪處理（10幀）。

從宏觀到微觀的觀察
使用高數(shù)值孔徑（NA）物鏡、電動載物臺和Olympus軟件實現(xiàn)全景多視野成像：
采集相鄰視場的連續(xù)3D（XYZ）和4D（XYZT）圖像。
從圖像采集到拼接全過程自動化
使用拼接功能快速準(zhǔn)備合成圖像
在不降低分辨率的情況下局部放大平鋪圖像

深層亮度補償
觀察較厚標(biāo)本時，隨著焦點變深，圖像會變暗。但是通過Bright Z深層亮度補償，可以連續(xù)調(diào)整檢測器靈敏度和激光功率，從而保持亮度的一致性。此功能可以作為同樣可自動對球差進行深度補償?shù)膭討B(tài)TruResolution物鏡的補充。

擴展分析功能
FVMPE-RS成像平臺軟件與奧林巴斯cellSens圖像分析軟件整合后可以擴展系統(tǒng)的分析能力。
選配功能包括：
Z-stack圖像的3D反卷積
估算圖像中每個顆粒的面積
圖像處理算法
共定位分析
還可選配NoviSight 3D細(xì)胞分析軟件。

技術(shù)參數(shù)